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大鼠Elisa試劑盒樣品處理及保存方法

更新時(shí)間:2022-09-26      瀏覽次數(shù):1121
  大鼠Elisa試劑盒是通過酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)特定物質(zhì)的試劑盒,試劑盒中會(huì)有不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品,在酶標(biāo)條中通過固相的抗原或抗體,酶標(biāo)記的抗原或抗體,酶作用的底物反應(yīng)可形成標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而進(jìn)行試驗(yàn)樣品的測(cè)定。
  大鼠Elisa試劑盒的樣品收集、處理及保存方法:
  1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
  2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
  3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
  5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  大鼠Elisa試劑盒操作步驟:
  1.通過計(jì)算并確定一次性實(shí)驗(yàn)所需的板條數(shù),取出所需板條放置在框架內(nèi),暫時(shí)用不到板條請(qǐng)放回鋁箔袋密封,保存于4℃。
  2.建議設(shè)置本底較正孔,即空白孔,設(shè)置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實(shí)驗(yàn)均需做標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照并畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  3.分別將標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100u1/孔)加入相應(yīng)孔中,用封板膠紙封住反應(yīng)孔,室溫孵育120分鐘。對(duì)于血清或血漿標(biāo)本,請(qǐng)加入50u1樣本分析緩沖液后加50u1標(biāo)本,如稀釋量大,請(qǐng)將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補(bǔ)充至100ul。
  4.洗板5次,且置厚吸水紙上拍干。
  5.加入生物素化抗體工作液(100u1/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,室溫孵育60分鐘。
  6.洗板5次,且置厚吸水紙上拍干。
  7.加入酶結(jié)合物工作液(100u1/孔)。用封板膠紙封住反應(yīng)孔,避光室溫孵育20分鐘。
  8.洗板5次,且置厚吸水紙上拍干。
  9.加入顯色劑TMB100u1/孔,避光室溫孵育20分鐘。
  10.加入終止液50u1/孔,混勻后即刻測(cè)量0D450值。
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