測定意義:POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
測定原理:POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。
需要的儀器,耗材:可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者 增加樣本量進(jìn)行檢測。
樣本處理
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備 收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或 細(xì)胞(功率 20%,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣本:直接檢測。
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