科研ELISA試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包括板內(nèi)差異性、板間差異性、批間差異性、重復(fù)性、特異性及交叉反應(yīng)性、回收率等。如果實(shí)驗(yàn)君經(jīng)常開(kāi)展ELISA實(shí)驗(yàn)，建議使用同一廠家的試劑盒，這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復(fù)性（當(dāng)然前提是實(shí)驗(yàn)條件的一致性）。對(duì)于科研用的定量ELISA試劑盒，不同的生產(chǎn)廠家使用的抗體對(duì)、酶以及底物、生產(chǎn)工藝和研發(fā)實(shí)力不盡相同，自然不同廠家試劑盒測(cè)出的數(shù)據(jù)會(huì)有差異。
一般的科研ELISA試劑盒都經(jīng)過(guò)血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的驗(yàn)證。在選擇試劑盒時(shí)，好要詳細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)，比如血漿樣本抗凝劑的使用是否與試劑盒兼容。另外，在某些情形下樣品中會(huì)存在干擾因素比如溶血血漿、高脂肪含量的樣品、人抗鼠抗體（HAMA）、細(xì)胞培養(yǎng)上清中含胎牛血清等。因此需根據(jù)樣品來(lái)選擇試劑盒，必要時(shí)還要根據(jù)樣本來(lái)適當(dāng)優(yōu)化。或在樣品收集前，好先閱讀一些可靠供應(yīng)商試劑盒的說(shuō)明書(shū)或直接咨詢。如果您的樣品為組織或細(xì)胞裂解物，則需要更謹(jǐn)慎的選擇試劑盒。市面上大多數(shù)的商業(yè)化試劑盒沒(méi)有經(jīng)過(guò)多種來(lái)源組織樣本的驗(yàn)證。這需要實(shí)驗(yàn)君能理解不是所有試劑盒所用的抗體對(duì)，都能特異的從一堆裂解物蛋白中特異檢出您的目的蛋白，還要考慮組織樣品的基質(zhì)效應(yīng)等。但如果實(shí)驗(yàn)君要了解組織樣品的制備問(wèn)題，我們另起一文來(lái)總結(jié)。
科研ELISA試劑盒技術(shù)可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。ELISA方法中有三個(gè)必要的試劑：
（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"；
（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"；
（3）酶反應(yīng)的底物。
一般可將科研ELISA試劑盒分為以下幾種類型，實(shí)驗(yàn)君首先需要根據(jù)自己的待檢物來(lái)確定試劑盒類型。
1）科研ELISA試劑盒雙抗體夾心法：針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測(cè)抗體。適用于測(cè)定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原如血漿中的細(xì)胞因子，科研ELISA試劑盒不適用于測(cè)定半抗原及小分子單價(jià)抗原。同理，也有雙抗原夾心法測(cè)抗體。
2）科研ELISA試劑盒直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗，即可測(cè)定抗原總量。此法操作手續(xù)簡(jiǎn)短，因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)。
3）間接法：間接法是檢測(cè)抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）來(lái)檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。
4）科研ELISA試劑盒競(jìng)爭(zhēng)法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測(cè)特異性抗體。